MTT/CCK8/XTT检测

一、实验介绍
(a) MTT：
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料。活细胞在琥珀酸脱氢酶和细胞色素c的作用下四唑环开裂，生成蓝色的甲瓒结晶并沉积在细胞中，甲瓒结晶的生成量仅仅与活细胞数目成正比（死细胞中的琥珀酸脱氢酶消失，不能还原MTT）。还原生成的甲瓒可溶解在DMSO（二甲基亚砜）中。用DMSO之前要尽量去掉培养液，DMSO溶解甲瓒颗粒，进行比色测定。
(b) CCK-8检测细胞增殖（活力）：
CCK-8（cell-counting kit-8）检测试剂盒是应用WST-8取代MTT被还原，WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。且WST-8相较XTT和MTS化学性状更稳定， 因此实验结果相对更加稳定。此外，WST-8相较MTT、XTT，线性范围相对宽，灵敏度更高。
当细胞增殖得越多越快，则formazan产生量越多，颜色越深；反之，当内外因造成的细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。应用酶标仪测定吸光值并进行统计学计算便可以获得细胞增殖（活性）相关数据。
(c) XTT：
化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色产物。当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的产物的吸光度与活细胞的数量成正比。用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）。代谢产物在OD450处有吸收峰。优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。 缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。
二、服务流程

1、细胞培养

2、药物处理

3、试剂处理

4、测定吸光度

5、撰写实验报告

三、客户提供

1、培养好的细胞（大于10⁶）以及所需药品。

2、药物作用方式（药物浓度、时间等）。

四、交付内容

实验报告：详细操作步骤、统计分析。

五、服务周期
10-20个工作日
六、收费标准

400元/次，3个时间点，3-5个剂量，6个复孔，一般以客户提供浓度参考进行浓度量效曲线，形式报告：量效曲线（或柱状图），原始材料：原始检测数据和简单分析

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