服务热线
0511-88880206
真核表达是近年来常用的一种表达重组蛋白的手段,它补充了一些原核蛋白表达系统中所缺乏的功能,例如真核表达时能够形成稳定的二硫键,在蛋白经过翻译后可对蛋白进行正确修饰,使表达出来的蛋白更具天然活性而不是被降解或者是形成包涵体;利用真核表达系统可以诱导高效表达,加快了人们对基因研究以及药物研究的进程。
哺乳动物细胞系统是真核表达系统中唯一可以表达复杂蛋白的系统,它能够指导真核表达蛋白进行正确折叠,提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能,所以它和昆虫酵母系统比较更具有发展潜力,哺乳动物细胞真核表达的蛋白与天然真核表达蛋白的结构、糖基化类型和方式几乎相同且能正确组装成多亚基蛋白,但成本较高也一定程度上减缓了它的发展速度。哺乳动物细胞表达系统主要是通过改造宿主细胞来提高外源蛋白的表达效率,常用的宿主细胞有CHO、COS、BHK、SP2 /0N 等,哺乳动物转染方法,有脂质体转染法,电穿孔法以及病毒转染等。
酵母表达系统的遗传背景清楚,操作较为简便,容易进行遗传操作,有较为完善的真核蛋白表达控制系统,在基因,遗传疾病研究中运用广泛,许多遗传性疾病的基因都和酵母基因有很高的同源性,研究酵母基因的编码以及其真核蛋白表达的蛋白可加深对这些疾病的了解。
实验流程
1、克隆目的基因;
2、真核重组表达载体的构建;
3、重组质粒转染宿主细胞;
4、筛选结果鉴定(细胞基因组DNA提取,PCR鉴定外源基因);
5、蛋白纯化及鉴定。
客户提供:
1、详细的基因表达实验设计方案;
2、与基因表达实验相关的其他信息
公司提供:
完整的实验报告(包括实验流程、材料方法、实验结果等)、真核重组表达质粒及相应的目的蛋白。