原核表达

原核表达系统是通过原核生物来获得外源蛋白的体系，主要包括：大肠杆菌表达系统，枯草芽孢杆菌表达，链霉菌表达等，其中大肠杆菌表达系统最为广泛，一般所说的原核系统主要是指大肠杆菌表达系统。

大肠杆菌蛋白表达原理：

原核生物绝大多数的基因按功能相关性成簇地排列，且密集于染色体上，共同形成一个转录单位–操纵子，也称基因表达的协同单位，大肠杆菌的乳糖操纵子含Z、Y 及A 三个结构基因，分别编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）、通透酶（permease）和乙酰基转移酶（transacetylase）；此外还有调控基因：操纵序列O（operator）、启动序列P（promoter）；而I（编码Lac 阻遏物，Lac repressor）不属于乳糖操子，Lac阻遏物是一种具有4 个相同亚基的四级结构蛋白，都有一个与诱导剂结合的位点。在没有乳糖存在时，Lac操纵子处于阻遏状态，Lac阻遏物能与操纵基因O结合，阻碍RNA 聚合酶与P 序列结合，阻止了转录的路径，从而抑制转录启动。而当有诱导剂（IPTG）存在时，诱导剂可与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白构象发生变化，导致阻遏物从操纵基因O 上解离下来，RNA 聚合酶不再受阻碍，启动子P 开始发生转录，启动反应开始发生转录。在这个操纵子体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经β-半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖–即生理上的诱导剂。通常选用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作为诱导剂，IPTG 是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。

实验流程

1、克隆目的基因；

2、原核重组表达载体的构建；

3、转化大肠杆菌；

4、加入IPTG诱导蛋白表达；

5、蛋白纯化及鉴定。

客户提供：

1、详细的基因表达实验设计方案；

2、与基因表达实验相关的其他信息

公司提供：

完整的实验报告（包括实验流程、材料方法、实验结果等）、原核重组表达质粒及相应的目的蛋白。